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色谱装柱机应用及工作原理

时间:2017-03-31      阅读:190

色谱装柱机应用及工作原理
 
以填装5um 硅胶 4.6×250 分析柱为例
连接装柱所需空压机和色谱装柱机,确保装柱机工作时机身稳固;
称取填料3.0-3.5g (4.6×250 分析柱标准需要2.8g,经验3.2g比较合适);
用40-50ml异丙醇(或异丙醇与乙腈比例1:1)溶解填料,用玻璃棒搅拌均匀后用超声波超3分钟, 以确保其分散性;
迅速将上述混合液倒入匀浆罐(尽量短时间内完成该工序并确保匀浆罐内无气泡),如匀浆罐不满再用异丙醇(或异丙醇与乙腈比例1:1)补满,理想情况是不需要再补充异丙醇(或异丙醇与乙腈比例1:1),熟练后可知需要多少原料,所需原料的梁与温度、填料溶解性有关;
迅速将匀浆罐和柱子连接到泵上以60MPA的压力,以甲醇(化学纯)做流动相开启装柱机,保持装柱机在60MPa压力下工作20分钟;
减压至30MPa运行5-10分钟,缓慢降压至系统无压力静止3分钟;
卸下柱子看柱头部分是否平整,如不平整用美工刀铲平(很需要技术的步骤);
将柱子接入液相色谱仪,用甲醇(色谱级)以1.0流速运行30分钟;
开始检验色谱柱效;
多次熟练此工作,以提高装柱质量。

备注: 异丙醇(或异丙醇与乙腈比例1:1)至少分析纯;
甲醇为控制成本可用化学纯,但事先需要经过0.2um有机滤膜过滤;
工作开始前开启装柱机用流动相甲醇冲洗管路,尽量确保管路中无气泡。

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