一、测定婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸原理
试样中的脂肪用溶剂提取。提取物在碱性条件下与甲醇反应生成脂肪酸甲酯，用配有氢火焰离子化检测器的食品和乳品中反式脂肪酸检测色谱仪分离顺式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外标法定量。
二、测定婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸试剂和材料
1. 石油醚：沸程30℃～60℃。
2 .乙mi（C4H10O）。
3 .乙醇（C2H6O）：体积分数为95%。
4 .正己烷（C6H14）：色谱纯。
5 .氨水（NH3•H2O）：25%～28%。
6 .氢氧化钾（KOH）。
7 .甲醇（CH4O）。
8 .淀粉酶：活力单位：1.5U/mg，根据活力单位大小调整用量。
9.无水硫酸钠（Na2SO4）。
10. 氢氧化钾-甲醇溶液（4mol/L）：称取26.4 g 氢氧化钾，溶于约80mL 甲醇中。冷却至室温，用甲醇定容至100mL，加入约5g 无水硫酸钠，充分搅拌后过滤，保留滤液。
11. 脂肪酸甲酯标准品：十八酸甲酯（C18:0）、反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t）、顺-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9c）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）、顺-9，12-十八碳二烯酸甲（C18:2-9c，12c），放入冰箱在-15℃以下保存。
12. 反式脂肪酸甲酯标准贮备液：浓度分别为10.0mg/ mL。称取500mg（精确到0.1 mg）反-9-十八碳一烯酸甲酯标准品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解并定容至50.0mL。放入冰箱在-15℃以下保存。
13. 反式脂肪酸甲酯标准中间液：浓度分别为1.0 mg/ mL。分别吸取两种反式脂肪酸甲酯标准储备液10.0 mL 入同一100 mL 容量瓶中并用正己烷（4.4）定容。临用前配制。亦作为标准曲线最高浓度。
14.反式脂肪酸甲酯标准工作液：临用前配制。分别吸取反式脂肪酸甲酯标准中间液，0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL 于10mL 容量瓶中，用正己烷定容，此浓度即为0、0.2、0.4、0.6、0.8 、1.0mg/mL 的标准工作液。
15.脂肪酸甲酯标准混合液：将脂肪酸甲酯标准品，用正己烷配制成脂肪酸甲酯标准混合溶液，其中每种成分的浓度约为0.05mg/mL 至0.5mg/mL。用于进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的鉴定。
16.刚果红溶液：称取1g 刚果红溶解稀释至100mL。
三、食品和乳品中反式脂肪酸检测色谱仪和设备
1. 气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器。
2. 旋转蒸发器。
3. 恒温水浴：40℃～80℃。
4. 涡旋振荡器。
5. 离心机：转速≥4000转/分钟。
6. 毛氏抽脂瓶。
7. 毛氏抽脂瓶摇混器。
8. 脂肪收集瓶：圆底烧瓶，与旋转蒸发仪配套。
9. 万分之一电子天平：感量为0.1mg。
四、测定婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸分析步骤
1.试样处理
A. 含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约1.5g，液体试样约5g（精确到0.1mg）于毛氏抽脂瓶中，加入约0.1g 淀粉酶（酶活力1.5U/mg），混合均匀后，加入8mL～10mL45℃±2℃的水，摇匀。盖上瓶塞置于55℃±2℃水浴中2 h，每隔10min 摇混一次。加入两滴约0.1 mol/L 的碘溶液，检验淀粉是否水解*。若无蓝色出现，则水解*，否则将毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至蓝色消失，取出冷却至室温。
B. 不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约1.5g，液体试样约10g（精确到0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10mL45℃±2℃的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样*散开，冷却至室温。
C. 脂肪的提取：向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL 氨水，混匀。置于60℃±2℃水浴中15 min～20min，冷却至室温。加入10mL乙醇和1滴刚果红溶液，混匀。再加入25mL乙mi，塞上软木塞，放到毛氏抽脂瓶）摇混器上震荡1min，也可采用手动振摇方式，再加入25mL石油醚，震荡1 min，不低于4000转/分钟离心分层。倾出上清液于脂肪收集瓶中，为第一次提取。在剩余试样液中再加入5mL 乙醇，25mL乙mi，25mL石油醚按上述操作步骤进行第二次提取。用离心机离心分层后倾出上清液与第一次的上清液合并。将脂肪收集瓶置于旋转蒸发器上，在60℃±2℃通入氮气条件下旋转蒸发除去溶剂，保留残渣，即为脂肪。
D. 脂肪酸甲酯的制备：将上述脂肪用正己烷溶解并定容至10.0mL，取出3.0mL 于10mL具塞试管中，加入0.3mL 氢氧化钾-甲醇溶液。盖紧瓶盖，涡旋振荡器上剧烈振摇2 min，4000转/分钟离心5min 后将上清液转入气相色谱试样瓶中，此为试样测定液。
2.测定
A. 参考色谱条件
色谱柱：PC2560毛细管柱（100*0.25*0.20）
进样口温度：250℃；载气（Ｎ2）
检测器温度：300℃
分流比：10：1
进样量：1.0μL
柱室：初温120℃,10℃/min升至175℃，保持10min，再以5℃/min升至210℃，保持5min，5℃升至230℃，保持5min
B.标准曲线的制备
在仪器最佳工作条件下，对系列标准工作液分别进样，以峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。
C.反式脂肪酸甲酯色谱峰的鉴别
对脂肪酸甲酯标准混合溶液进样，进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的鉴定。反十八碳一烯酸甲酯和反十八碳二烯酸甲酯色谱峰的位置图A.1
D.试样液的测定
将试样测定液注入气相色谱仪，试样测定液中反式脂肪酸甲酯峰位置图A.1。分别测定区域C18：1t和区域C18：2t的峰面积，查标准曲线得到试样测定液中反十八碳一烯酸甲酯和反十八碳二烯酸甲酯的质量浓度。
五、 测定婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸分析结果的表述
A.试样中反十八碳一烯酸和反十八碳二烯酸含量分别计为X1 和X2，按式（1）分别计算：
式中：
X（1或2）——试样中反十八碳一烯酸或反十八碳二烯酸含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；
V——试样的定容体积，单位毫升（mL）；
m——试样质量，单位为克（g）；
c1——试样测定液中反十八碳一烯酸甲酯或反十八碳二烯酸甲酯的质量浓度，单位为毫克每毫升
（mg/mL）；
Mai——反十八碳一烯酸或反十八碳二烯酸的分子量；
Mbi——反十八碳一烯酸甲酯或反十八碳二烯酸甲酯的分子量。
B.试样中反式脂肪酸的总含量 X，按式（2）计算：
式中：
X——反式脂肪酸的总含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；
X1——试样中反十八碳一烯酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；
X2——试样中反十八碳二烯酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
本标准检出限为：反式脂肪酸总含量30 mg/kg。
